本作是系列第一作的前傳，講述了在洋館事件前一天發生的「黃道特快車（Ecliptic Express）事件」，揭示了 T 病毒洩漏的真正原因。
惡靈古堡 0：黃道特快車與女王水蛭的復仇
序章：惡夢的開端
【黃道特快車】 1998 年 7 月 23 日晚。 在拉昆市郊外的阿克雷山區，一輛隸屬於保護傘公司的豪華列車「黃道特快車」正行駛在森林中。突然，無數巨大的水蛭襲擊了列車，乘客與警衛在慘叫聲中被吞噬、轉化為喪屍。 在遠處的山崖上，一名身穿白袍的神秘青年冷冷地注視著這一切，輕聲說道：「復仇開始了。」
【緊急降落】 與此同時，S.T.A.R.S. 的 B 小隊（Bravo Team）搭乘直升機前往山區調查離奇殺人事件。因引擎故障，直升機迫降在森林中。 年僅 18 歲的新人隊員蕾貝卡·錢伯斯（Rebecca Chambers）在搜索中發現了停駛的列車。她獨自登車調查，卻遭到了喪屍的襲擊。 在列車上，她遇到了一名被通緝的囚犯——前海軍少尉比利·科恩（Billy Coen）。他涉嫌屠殺 23 人而被判死刑，押送他的憲兵車在經過這片森林時遭到襲擊，只有他倖存並逃上了火車。
【不得不結盟】 蕾貝卡試圖逮捕比利，但面對成群的喪屍、喪屍犬以及巨大的變異蠍子，她意識到單憑一己之力無法生存。 比利提議合作：「想活命就跟我聯手。」 雖然不情願，蕾貝卡還是同意了。列車突然啟動失控，兩人在這輛死亡列車上並肩作戰，最終在列車撞向保護傘的幹部養成所前緊急剎車。
第一章：幹部養成所的陰謀
【馬庫斯的亡靈】 兩人倖存下來，進入了一座古老的洋館式建築——保護傘幹部養成所。 大廳中掛著第一任所長詹姆斯·馬庫斯（James Marcus）的畫像。 在探索過程中，他們發現白袍青年能夠操控水蛭，並能聚集成擬態馬庫斯攻擊他們。 與此同時，透過監視器觀察這一切的兩個人影——威斯卡與威廉·柏金，感到震驚。 馬庫斯早在 10 年前就應該被他們聯手暗殺了（奉保護傘總裁斯賓瑟之命）。這個死而復生的「馬庫斯」究竟是誰？
【比利的過去】 在相互扶持中，蕾貝卡逐漸信任比利。當她問起那場屠殺時，比利沉默許久後說出了真相。 一年前在非洲，比利的部隊被命令攻擊一個游擊隊據點。但在穿越叢林後，他們發現那裡只是一個普通的村莊。 指揮官下令屠村以掩蓋錯誤。比利極力反對，卻被打暈。當他醒來時，屠殺已經結束，而他成了替罪羊。 得知真相的蕾貝卡決心相信這名「殺人犯」。
第二章：保護傘的內鬨與女王水蛭
【威斯卡的背叛】 威斯卡意識到這次事件可能導致保護傘的崩潰，決定藉此機會脫離公司，並將 S.T.A.R.S. 引誘至洋館收集數據（連接到一代劇情）。威廉則決定炸毀養成所，銷毀證據，專心完成他的 G 病毒。
【真相大白】 蕾貝卡與比利在地下深處遇到了白袍青年。 青年在他們面前變身，顯露真面目——他是由無數水蛭與馬庫斯的屍體結合而成的生物。 10 年前，馬庫斯被殺死並棄屍下水道。但他培育的**「女王水蛭」**鑽入了他的體內，在漫長的歲月中融合了他的 DNA 與記憶，最終「復活」。 他不是馬庫斯，他是擁有了馬庫斯記憶與恨意的女王水蛭。 他的目的只有一個：毀滅保護傘，毀滅世界。
終章：陽光下的敬禮
【最終決戰】 女王水蛭變成了巨大的醜陋怪物。 這時，設施的自毀程序已啟動。 蕾貝卡發現女王水蛭懼怕陽光。她與比利合作，在激戰中打開了地下停機庫的天窗。 第一縷晨光射入，女王水蛭在紫外線的灼燒下痛苦掙扎。 比利舉起那把強力的馬格南手槍（Magnum），瞄準了怪物。 「結束了。」 一聲槍響，女王水蛭被打得粉碎，跌入了火海。
【告別】 兩人在設施爆炸的前一刻逃到了地面。 眼前是阿克雷山區的晨曦，遠處可以看見另一座洋館（一代的舞台）。 比利獲得了自由。 蕾貝卡摘下了比利的軍籍牌（Dog Tag），戴在自己脖子上。 「官方報告會說，比利·科恩中尉已經死亡了。」 這是她對戰友的承諾。 兩人互相敬禮。比利轉身消失在森林中，去尋找他的新生活。 蕾貝卡則轉身走向洋館，準備迎接即將到來的、更殘酷的戰鬥。
—— Biohazard 0 End ——
【深度解析】
始祖病毒的起源 本作揭示了 T 病毒的原型是馬庫斯將始祖病毒與水蛭 DNA 結合的產物。這解釋了為何 T 病毒感染者（喪屍）具有強烈的食慾與生命力。
雙人合作系統（Partner Zapping） 遊戲允許玩家在蕾貝卡（弱戰鬥、可合成草藥）與比利（強戰鬥、無法合成）之間切換。這種設計不僅增加了策略性，更強調了兩人在極限環境下互補與信任的關係。
比利的結局 比利是系列中少數「僅登場一次但結局圓滿」的主角。他的故事線完整閉環：從被冤枉的死囚到被信任的伙伴，最後獲得自由。雖然他再也沒有在後續作品出現，但他在玩家心中留下了深刻的硬漢形象。
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