【序章：被囚禁的現代刺客】
故事發生在 2012 年。 普通的酒保青年德斯蒙·邁爾斯（Desmond Miles），突然遭到神祕組織綁架，被囚禁在一所高科技實驗室中。綁架他的是一家名為「阿布斯泰戈工業（Abstergo Industries）」的公司。 主導實驗的**華倫·維迪克博士（Dr. Warren Vidic）與他的女助手露西·斯蒂爾曼（Lucy Stillman）強迫德斯蒙使用一台名為「Animus」**的機器。這台機器能讀取人類 DNA 中遺傳的「先祖記憶」，讓使用者如同親身經歷般重現祖先的過去。
原來，德斯蒙並非普通人，他出生於一個古老的刺客家族，雖然他在年輕時逃離了家族，但他的血液中仍流淌著刺客的基因。阿布斯泰戈需要尋找一段特定的記憶，而這段記憶藏在德斯蒙的祖先——活躍於 12 世紀第三次十字軍東征時期的刺客大師**阿泰爾（Altaïr Ibn-La'Ahad）**身上。 為了保命，德斯蒙被迫躺進 Animus，意識穿越回了 1191 年的中東。
【古代篇：阿泰爾的救贖之路】
1. 墮落的刺客 阿泰爾是刺客兄弟會中最具天賦但也最傲慢的成員。在所羅門聖殿執行任務時，他因自大違背了「不殺無辜」、「不暴露行蹤」等信條，導致任務失敗，同伴一死一重傷，兄弟會的死敵**聖殿騎士團（Knights Templar）也因此進攻刺客總部「馬西亞夫（Masyaf）」。 雖然阿泰爾利用機關擊退了敵人，但導師阿爾穆林（Al Mualim）**為了懲罰他的傲慢，剝奪了他的階級與裝備，將他貶為最低階的新手。 為了贖罪並恢復地位，阿泰爾必須執行導師指派的任務：刺殺九名正在聖地製造戰亂的關鍵人物。
2. 九個目標與一個真相 阿泰爾踏上了前往大馬士革、阿卡與耶路撒冷的旅程。他逐一獵殺這九名目標，其中包含軍火商、奴隸販子、醫生與騎士團長等。 然而，隨著任務進行，阿泰爾發現了令人不安的共同點：
這九人雖然隸屬不同陣營（十字軍或薩拉森人），但他們私底下似乎都聽命於同一個組織。
他們每個人在死前都辯稱自己的惡行是為了「更大的善」——為了終結戰爭，為了創造和平。 導師阿爾穆林最終揭露了真相：這九人都是聖殿騎士團的成員。而他們尋找並守護的，是一個名為**「伊甸碎片（Piece of Eden）」**（遊戲中稱為「金蘋果」）的古代神器。據說這個神器擁有控制人心、製造幻覺的神力。
3. 最後的目標與背叛 阿泰爾殺死了第八個目標後，得知最後的目標是聖殿騎士團的大團長羅伯特·德·薩布爾（Robert de Sablé）。 阿泰爾前往阿爾蘇夫戰場，在獅心王理查的軍營前與羅伯特決鬥。羅伯特在臨死前說出了驚人的真相： 「你以為只有九個人嗎？不，還有第十個。那個派你來殺我們，好讓他獨佔伊甸碎片的人……正是你的導師，阿爾穆林。」 阿爾穆林早已背叛了兄弟會，與聖殿騎士團勾結，但他不想分享神器，所以利用阿泰爾這把利刃清除了其他競爭者。
4. 師徒決裂 阿泰爾火速趕回馬西亞夫，發現村民與刺客們都已被阿爾穆林利用「金蘋果」的力量洗腦控制。 在城堡花園中，阿泰爾面對了自己的導師。阿爾穆林利用神器的力量製造出九個目標的幻影，甚至分身成多個自己來攻擊阿泰爾。 「我看過真相！這顆蘋果展示了神蹟，它能消除自由意志，從而消除戰爭！」阿爾穆林狂熱地宣稱。 阿泰爾反駁：「奪走自由的和平不是真正的和平。」 憑藉著超越常人的意志力與戰鬥技巧，阿泰爾看穿了幻象，刺殺了阿爾穆林。 隨著導師倒下，金蘋果滾落在地，投射出一幅巨大的全息地圖，上面標示了世界各地還藏有其他神器的位置。
【現代篇：覺醒與未完的戰鬥】
記憶同步結束，德斯蒙從 Animus 中醒來。 維迪克博士與背後的財團（現代聖殿騎士團）欣喜若狂，因為他們終於通過阿泰爾的記憶，得到了古代地圖——這就是他們綁架德斯蒙的真正目的。他們計劃尋找剩下的伊甸碎片，發射到衛星軌道上，以此控制全人類的思想，達成永久的「秩序與和平」。
德斯蒙已無利用價值，原本將被處決。但在露西（她其實是潛伏在聖殿騎士中的現代刺客）的極力爭取下，德斯蒙暫時保住了性命，被留在了實驗室。 就在德斯蒙孤獨一人時，他發現自己產生了異變。長時間的記憶同步讓他獲得了祖先阿泰爾的特殊能力——「鷹眼視覺（Eagle Vision）」。 當他開啟鷹眼視覺看向臥室牆壁時，原本空白的牆上佈滿了用血寫成的神秘符號與文字。那是之前的實驗體（第 16 號實驗體）留下的訊息，預示著世界末日與聖殿騎士的陰謀。
德斯蒙看著這些血字，明白了自己的命運。 這不是結束，戰爭才剛剛開始。
（一代 完）
【補充設定】
斷指儀式：古代刺客為了方便使用袖劍（Hidden Blade），通常會切除無名指。但在遊戲中也暗示這是一種承諾的象徵。現代篇中露西向德斯蒙展示她彎曲的無名指，暗示了自己的刺客身份。
Animus 的副作用：長期使用 Animus 會導致「出血效應」，即使用者的意識會與祖先混淆，但也因此能快速學會祖先的技能（如鷹眼、跑酷與戰鬥技巧）。
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